Mitocôndria, pesquisa de anticorpos por Western Blot, soro

Orientações necessárias

• Este exame não necessita de preparo.

Processamento e adequação da amostra

• Aguardar 30 minutos;
• Centrifugar a 2200 g por 10 minutos a 18 ºC ;
• Volume ideal: 1,0 mL; volume mínimo: 0,5 mL;
• Não aliquotar;
• Enviar à seção, em temperatura ambiente.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: 8 horas;

Refrigerada (2-8 ºC): 7 dias;

Congelada (-20 ºC): 3 meses.

Método

• Western Blot.

Valor de referência

• Não reagente.

Interpretação e comentários

• A pesquisa de anticorpos antimitocôndria (AMA) é um teste complementar da cirrose biliar primária (CBP). Esses auto-anticorpos são específicos dessa doença e podem anteceder suas manifestações clínicas por anos.
• O principal auto-antígeno é a subunidade E2 da piruvato desidrogenase (PDH). Os anticorpos antimitocôndria podem ser pesquisados por imunofluorescência indireta em tecidos de rato (rim e fígado), assim como por Elisa e por Western Blot. O teste de imunofluorescência não permite identificar os antígenos mitocondriais reconhecidos pelo soro. Já o exame feito por Elisa é específico para a subunidade E2 da PDH (74 kDa).
• O Western Blot, por sua vez, permite identificar o antígeno E2-PDH e também anticorpos contra outros antígenos mitocondriais relevantes, como a fração E2 da 2-cetoácido desidrogenase de cadeia ramificada (52 kDa), a fração E2 da oxoglutarato desidrogenase (50 kDa) e a subunidade E1 e proteína de ligação da PDH. Um estudo recente mostrou que 13% dos indivíduos com CBP tiveram teste negativo pela imunofluorescência indireta, mas positivo pelo Western Blot. Já em 6% dos portadores de CBP com reatividade antimitocôndria, não houve reconhecimento do tradicional auto-antígeno E2-PDH (Dig Liv Dis 2005, 37: 108).

Orientações necessárias

• Este exame não necessita de preparo.